HSP70-2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-417733-LAC

HSPA1B kodiert das induzierbare Chaperon HSP70-2, einen zentralen Bestandteil der zellulären Hitzeschockantwort, der die Proteostase bei thermischem, oxidativem und inflammatorischem Stress schützt. HSP70-2 bindet freiliegende hydrophobe Bereiche an neu synthetisierten oder fehlgefalteten Proteinen, um Aggregation zu verhindern, und unterstützt in Zusammenarbeit mit HSP40/DNAJ-Cochaperonen und Nukleotidaustauschfaktoren deren Refaltung. Über Funktionen in der Proteinkontrolle, der Wechselwirkung mit der UPR (Unfolded Protein Response) sowie der Regulation von Apoptose und angeborener Immun-Signalgebung beeinflusst HSP70-2 unter Stress die Entscheidung zwischen Zellüberleben und Zelltod. Eine fehlregulierte Aktivität der HSP70-Familie wird mit proteotoxischen und inflammatorischen Zuständen in Verbindung gebracht, wodurch HSPA1B ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zu Stressadaptationswegen darstellt.

HSP70-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSPA1B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HSP70-2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSPA1B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HSP70-2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSPA1B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.