Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 56: sc-403455-ACT

FKBP4 codifica la inmunofilina FKBP52 (HSP56), una isomerasa cis–trans de peptidil-prolil y co-chaperona de HSP90 que regula el plegamiento, la maduración y el tráfico de proteínas cliente. HSP56 actúa en complejos multiproteicos de chaperonas que modulan la señalización de los receptores de hormonas esteroideas, incluidas las vías de los receptores de glucocorticoides, andrógenos y progesterona, influyendo en la estabilidad del receptor, su translocación nuclear y la salida transcripcional. Mediante interacciones mediadas por TPR con HSP90 y otras co-chaperonas, FKBP4 integra la proteostasis sensible al estrés con programas de transducción de señales que determinan el crecimiento y la diferenciación celular. Las redes chaperona–co-chaperona desreguladas en las que participa FKBP4 se han asociado con alteraciones de la señalización endocrina y con fenotipos de homeostasis proteica relevantes para la biología del cáncer y la investigación en neurodegeneración.

HSP 56 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FKBP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSP 56 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FKBP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FKBP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSP 56. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FKBP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSP 56 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSP 56 en células tumorales con expresión de FKBP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.