Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 40: sc-402810-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) HSP 40 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) HSP 40 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR HSP 40 (h) y el plásmido de activación CRISPR HSP 40 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de DNAJB1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSP 40 Anticuerpo (B-3): sc-398766
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 40 | sc-402810-ACT | 20 µg | $397.00 |
DNAJB1 codifica la HSP40 humana (homólogo de DnaJ, subfamilia B, miembro 1), una cochaperona citosólica que se asocia con HSP70 para regular el plegamiento, el replegamiento y la clasificación/destino de sustratos mal plegados. Al estimular la actividad ATPasa de HSP70, HSP40 contribuye al mantenimiento de la proteostasis durante respuestas al estrés, incluido el choque térmico y el estrés oxidativo, y se conecta con vías que regulan la degradación por el sistema ubiquitina–proteasoma y la autofagia. La actividad de DNAJB1 influye en las respuestas celulares al estrés proteotóxico, y estudios la relacionan con neurodegeneración, replicación viral y procesos oncogénicos en los que las redes de chaperonas modulan la señalización y la estabilidad proteica. La desregulación del equilibrio entre chaperonas y cochaperonas se estudia con frecuencia por su impacto en proteínas propensas a la agregación y en programas transcripcionales adaptativos al estrés.
HSP 40 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DNAJB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
HSP 40 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DNAJB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DNAJB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSP 40. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DNAJB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSP 40 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSP 40 en células tumorales con expresión de DNAJB1 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.