Plasmide Double Nickase (h) HSP 27: sc-400285-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSP 27 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSP 27 Double Nickase (h) et le plasmide HSP 27 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSP 27 Antibody (F-4): sc-13132
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSP 27 | sc-400285-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HSP 27 | sc-400285-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPB1 code la petite protéine de choc thermique HSP27, une chaperonne moléculaire indépendante de l’ATP qui stabilise les protéines dépliées, soutient la protéostasie et module la dynamique du cytosquelette via des interactions avec l’actine et les filaments intermédiaires. HSP27 est induite par le stress cellulaire via la signalisation des facteurs de choc thermique et participe aux réponses au stress oxydant, à la régulation de l’apoptose et au contrôle de l’agrégation des protéines. Par ces fonctions, HSPB1 influence des voies liées à l’inflammation, à la survie cellulaire et au remodelage adaptatif au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence, des lésions cardiovasculaires liées au stress et de la tolérance au stress des cellules cancéreuses. Des modifications de l’expression de HSPB1 ou de son état de phosphorylation ont été associées à des changements de la stabilité du protéome et des sorties de signalisation du stress dans de multiples contextes pathologiques.
HSP 27 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.