Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 27: sc-400285-ACT

HSPB1 codifica la proteína de choque térmico 27 (HSP 27), una pequeña chaperona de choque térmico que estabiliza proteínas desplegadas y favorece la proteostasis durante el estrés celular. HSP 27 modula la dinámica del citoesqueleto de actina, regula la señalización apoptótica y contribuye a las respuestas redox e inflamatorias a través de redes de quinasas activadas por estrés, incluidas las vías MAPK/p38. Mediante su oligomerización dependiente de fosforilación y sus interacciones con proteínas cliente, HSP 27 influye en la supervivencia y migración celulares, así como en la biología de los gránulos de estrés. La expresión o función desregulada de HSPB1 se ha asociado con la adaptación al estrés en células cancerosas, procesos neurodegenerativos y modelos de lesión cardiometabólica, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios de vías y mecanismos.

HSP 27 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HSPB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSP 27 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HSPB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HSPB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSP 27. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HSPB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSP 27 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSP 27 en células tumorales con expresión de HSPB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.