Plásmido CRISPR de Activación (h) HSP 20: sc-403164-ACT

HSPB6 codifica la pequeña proteína de choque térmico HSP 20, una chaperona molecular inducible por estrés que modula el plegamiento de proteínas, la dinámica del citoesqueleto y la proteostasis. En el músculo liso y en tipos celulares cardiovasculares, HSP 20 participa en programas de señalización vinculados a las vías de AMPc/PKA y óxido nítrico–GMPc, con efectos dependientes de la fosforilación sobre la remodelación de la actina y el tono contráctil. HSP 20 también interactúa con la apoptosis y las respuestas al estrés oxidativo, influyendo en la supervivencia celular bajo condiciones proteotóxicas e inflamatorias. La expresión o señalización desregulada de HSPB6 se ha asociado con una reactividad vascular alterada, la adaptación al estrés de los cardiomiocitos y disfunción del músculo liso, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la biología cardiovascular y de las vías respiratorias.

HSP 20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HSPB6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSP 20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HSPB6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HSPB6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSP 20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HSPB6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSP 20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSP 20 en células tumorales con expresión de HSPB6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.