HSF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-400432-KO-2

Descripción general

El factor de choque térmico 1 (HSF1) es un regulador transcripcional maestro que coordina la respuesta celular al choque térmico mediante la inducción de chaperonas y genes de proteostasis, incluidos miembros de las familias HSP70 y HSP90, para preservar el plegamiento de proteínas y limitar el estrés proteotóxico. Más allá de la adaptación al estrés agudo, HSF1 integra señales procedentes de la función del proteasoma, la traducción y el estado metabólico para influir en el control de calidad de las proteínas, la organización del citoesqueleto y los programas de supervivencia celular. La actividad de HSF1 se entrecruza con vías como la estabilización de clientes dependiente de HSP90, la autofagia y la dinámica de los gránulos de estrés, dando forma a cómo responden las células a estresores ambientales e intracelulares. La señalización desregulada de HSF1 se ha implicado en la transformación maligna y el mantenimiento tumoral, así como en la neurodegeneración y otros trastornos asociados al mal plegamiento de proteínas, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HSF1 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HSF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HSF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HSF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HSF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HSF1 para la investigación de la señalización de HSF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HSF1 críticos para la función de HSF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HSF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HSF1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HSF1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HSF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HSF1 (h) y el plásmido HDR HSF1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HSF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HSF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.