Plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST6 (h): sc-408948

Présentation

HS3ST6 code pour l’héparane sulfate–glucosamine 3‑O‑sulfotransférase 6, une enzyme localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la 3‑O‑sulfatation des chaînes d’héparane sulfate, générant des motifs de sulfatation rares qui façonnent les interactions entre l’héparane sulfate et les protéines. En modulant la structure fine des protéoglycanes à héparane sulfate, HS3ST6 influence la liaison des ligands et la formation de gradients dans des contextes de signalisation de la matrice extracellulaire et de la surface cellulaire, affectant des processus tels que l’adhésion cellulaire, la migration et la signalisation médiée par les récepteurs. Des altérations des profils de sulfatation de l’héparane sulfate sont liées à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et des cytokines et ont été associées à la biologie tumorale et aux microenvironnements inflammatoires, faisant de HS3ST6 une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation dépendante des glycosaminoglycanes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HS3ST6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HS3ST6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HS3ST6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HS3ST6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HS3ST6 pour l'étude de la signalisation de HS3ST6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HS3ST6 essentiels à la fonction de HS3ST6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HS3ST6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HS3ST6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HS3ST6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HS3ST6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HS3ST6 plasmide HDR (h) et le HS3ST6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HS3ST6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HS3ST6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.