Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hrs (r): sc-437306

Présentation

Hrs (substrat de tyrosine kinase régulé par le facteur de croissance des hépatocytes ; également appelé HGS) est une protéine de tri endosomal qui fonctionne au sein du complexe ESCRT-0 pour reconnaître les protéines membranaires ubiquitinylées et orienter leur trafic vers les corps multivésiculaires en vue d’une dégradation lysosomale. En coordonnant la maturation des endosomes et la diminution de l’expression des récepteurs, Hrs influence les signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase et d’autres récepteurs de surface, modulant ainsi des voies qui contrôlent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Cette protéine est essentielle au renouvellement des protéines membranaires, au transport endosome-lysosome et à la protéostasie, des processus souvent étudiés dans le contexte de la neurodégénérescence, de l’inflammation et des dérégulations de la signalisation oncogénique. Dans les systèmes chez le rat, la perturbation de Hrs soutient la recherche mécanistique sur la manière dont une altération du tri endosomal affecte le devenir des récepteurs et le remodelage des voies de signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hrs (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hrs.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de Hrs, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de Hrs
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hrs plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le Hrs plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hrs plasmide HDR (r) et le Hrs (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.