Plásmido CRISPR de Activación (h) Hrs: sc-401501-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) Hrs es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) Hrs incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR Hrs (h) y el plásmido de activación CRISPR Hrs (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de HGS. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Hrs Anticuerpo (C-7): sc-271455
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) Hrs | sc-401501-ACT | 20 µg | $397.00 |
El HGS humano codifica el sustrato de tirosina cinasa regulado por el factor de crecimiento de hepatocitos (Hrs), un adaptador de clasificación endosomal que coordina el tráfico dependiente de ubiquitina de receptores activados. Hrs actúa dentro del complejo ESCRT-0 para reconocer carga ubiquitinada y promover su clasificación en vesículas intraluminales de los cuerpos multivesiculares, moldeando así la degradación lisosomal y la atenuación de la señal de los receptores. Mediante el control de la endocitosis, la maduración endosomal y el recambio de proteínas de membrana, Hrs influye en vías vinculadas a la señalización por factores de crecimiento, la dinámica de receptores de citocinas y la homeostasis celular. La alteración de la clasificación endosomal y la disfunción de ESCRT se han asociado con la persistencia de la señalización oncogénica y fenotipos neurodegenerativos, lo que convierte a HGS/Hrs en un nodo útil para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades dependiente del tráfico intracelular.
Hrs El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HGS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
Hrs El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HGS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HGS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Hrs. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HGS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Hrs en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Hrs en células tumorales con expresión de HGS silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.