Plasmide Double Nickase (m) HRI: sc-420950-NIC

Le gène murin **Eif2ak1** code l’inhibiteur régulé par l’hème (HRI), une kinase d’eIF2α sensible au stress qui atténue la traduction globale en phosphorylant **EIF2S1** en situation de carence en hème, de stress oxydant et de stress protéotoxique. HRI est un composant clé de la réponse intégrée au stress (ISR), coordonnant la reprogrammation traductionnelle et des programmes transcriptionnels en aval, tels que l’adaptation pilotée par **ATF4**, afin de rétablir la protéostasie et l’équilibre redox. Dans les cellules érythroïdes, HRI contribue à coupler la disponibilité en hème à la synthèse des globines et soutient la maturation au cours de l’hématopoïèse, tandis que, dans des contextes plus larges, il relie la détection du stress au fonctionnement du ribosome et au contrôle de la qualité des protéines. Une signalisation ISR dérégulée et un contrôle traductionnel aberrant impliquant HRI ont été associés à des phénotypes liés à l’anémie et à une mauvaise adaptation au stress dans des modèles pertinents pour des processus inflammatoires et neurodégénératifs.

HRI Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Eif2ak1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Eif2ak1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Eif2ak1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Eif2ak1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.