Plásmido CRISPR de Activación (h) HRASLS2: sc-412404-ACT

HRASLS2 (supresor 2 tipo HRAS), también conocido como H-rev107-3, codifica una enzima asociada a la membrana con actividades de fosfolipasa A1/2 y aciltransferasa, que remodela la composición de los fosfolípidos e influye en la señalización mediada por lípidos. Al regular la liberación de ácidos grasos y el recambio de fosfolípidos, HRASLS2 puede afectar la dinámica de la membrana, el tráfico vesicular y las respuestas celulares vinculadas al control del crecimiento y la diferenciación. La expresión alterada de HRASLS2 se ha estudiado en el contexto de redes de señalización oncogénica y de la reprogramación del metabolismo lipídico, donde los cambios en la homeostasis de los lípidos de membrana pueden modular vías proliferativas y de respuesta al estrés. Su conexión funcional con fenotipos celulares asociados a Ras la hace relevante para estudios mecanísticos de biología tumoral, metabolismo y transiciones de estado celular.

HRASLS2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HRASLS2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HRASLS2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HRASLS2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HRASLS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HRASLS2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HRASLS2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HRASLS2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HRASLS2 en células tumorales con expresión de HRASLS2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.