Plásmido CRISPR de Activación (h) HPRG: sc-404772-ACT

La glucoproteína rica en histidina (HPRG), codificada por el gen humano HRG, es una proteína plasmática secretada que se une a la heparina, el plasminógeno, la fibrina(el fibrinógeno) y a iones metálicos divalentes para modular las interacciones con la matriz extracelular y el equilibrio proteolítico. A través de estas interacciones, HPRG influye en la dinámica de la coagulación y la fibrinólisis, la señalización angiogénica y procesos de la inmunidad innata, incluido el comportamiento de los neutrófilos y la eliminación de restos celulares. La expresión de HRG y los niveles circulantes de HPRG se han investigado como variables asociadas a estados inflamatorios y a la biología vascular, con implicaciones para interpretar fenotipos vinculados a la hemostasia y la inmunidad. Como proteína multifuncional de unión a ligandos, HPRG se estudia con frecuencia en vías que conectan la tromboinflamación, la remodelación de la matriz y la señalización de glicosaminoglicanos en la superficie celular.

HPRG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HRG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HPRG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HRG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HRG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HPRG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HRG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HPRG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HPRG en células tumorales con expresión de HRG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.