Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HPK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402367
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HPK1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HPK1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HPK1 Anticuerpo (G-9): sc-374183
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HPK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402367 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MAP4K1 codifica la proteína quinasa 1 de progenitores hematopoyéticos (HPK1), una quinasa de serina/treonina de la familia Ste20 expresada predominantemente en células inmunitarias y situada aguas arriba de la señalización MAPK. HPK1 actúa como regulador negativo de la señalización de los receptores de antígeno al modular complejos adaptadores proximales y moldear la activación posterior de JNK/p38, influyendo así en las salidas de señalización del receptor de células T y del receptor de células B. A través de estas funciones, HPK1 afecta los umbrales de activación de los linfocitos, la producción de citocinas y la dinámica de la sinapsis inmunológica. La actividad desregulada de MAP4K1/HPK1 se ha asociado con una homeostasis inmunitaria alterada y se ha investigado en contextos de inflamación mediada por el sistema inmunitario e inmunología tumoral como modulador de las respuestas inmunitarias antitumorales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HPK1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MAP4K1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MAP4K1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MAP4K1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HPK1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MAP4K1 para la investigación de la señalización de HPK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MAP4K1 críticos para la función de HPK1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MAP4K1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HPK1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HPK1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MAP4K1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HPK1 (h) y el plásmido HDR HPK1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MAP4K1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MAP4K1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.