Plasmide Double Nickase (h) HP1γ: sc-417205-NIC

CBX3 code pour la protéine 1 de l’hétérochromatine gamma (HP1γ), un lecteur de la chromatine qui se lie à la lysine 9 de l’histone H3 méthylée (H3K9me) via son chromodomaine et contribue à l’organisation de l’hétérochromatine. HP1γ participe à la régulation épigénétique de la transcription, au maintien de la stabilité du génome et à la coordination de la réplication et de la réparation de l’ADN grâce à une compaction dynamique de la chromatine. En influençant le silençage des éléments répétitifs et en régulant des programmes d’expression génique, CBX3 est étudié dans des voies liées au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation et aux réponses au stress. Des états de chromatine associés à HP1γ dérégulés ont été rapportés dans de multiples contextes de recherche sur le cancer et le neurodéveloppement, ce qui étaye son utilisation comme cible pour des études mécanistiques de phénotypes pilotés par l’épigénome.

HP1γ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CBX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CBX3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CBX3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CBX3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.