HP1γ Plasmide Double Nickase (h): sc-417205-NIC

CBX3 codifica per la proteina 1 dell’eterocromatina gamma (HP1γ), un lettore della cromatina che si lega alla lisina 9 dell’istone H3 metilata (H3K9me) tramite il suo cromodominio e contribuisce all’organizzazione dell’eterocromatina. HP1γ partecipa alla regolazione epigenetica della trascrizione, al mantenimento della stabilità del genoma e al coordinamento della replicazione e della riparazione del DNA attraverso una compattazione dinamica della cromatina. Influenzando il silenziamento degli elementi ripetitivi e regolando programmi di espressione genica, CBX3 viene studiato in vie collegate al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione e alle risposte allo stress. Stati della cromatina associati a HP1γ deregolati sono stati riportati in molteplici contesti di ricerca oncologica e neuroevolutiva/neurosviluppo, a supporto del suo impiego come bersaglio per studi meccanicistici di fenotipi guidati dall’epigenoma.

HP1γ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CBX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CBX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CBX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CBX3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.