Plásmido CRISPR de Activación (h) HP1γ: sc-417205-ACT

CBX3 codifica la proteína 1 gamma de la heterocromatina (HP1γ), un factor asociado a la cromatina que se une a la metilación de la lisina 9 de la histona H3 y ayuda a organizar la estructura de la cromatina de orden superior. HP1γ participa en la formación de heterocromatina, la regulación transcripcional, la replicación del ADN y la respuesta al daño del ADN mediante interacciones con enzimas y complejos epigenéticos (escritores/lectores) y con la maquinaria de procesamiento de ARN. Al moldear la accesibilidad de la cromatina y la estabilidad del genoma, CBX3 influye en la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y las redes de expresión génica sensibles al estrés. La actividad desregulada de HP1γ y los patrones alterados de expresión de CBX3 se han vinculado con estados epigenéticos aberrantes observados en múltiples contextos de cáncer y enfermedades del neurodesarrollo, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de mantenimiento de la cromatina y del genoma.

HP1γ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CBX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HP1γ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CBX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CBX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HP1γ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CBX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HP1γ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HP1γ en células tumorales con expresión de CBX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.