Plasmide Double Nickase (h) HoxD3: sc-405920-NIC

HOXD3 code le facteur de transcription humain à homéoboîte HoxD3, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à la mise en place de l’axe antéro-postérieur et de l’identité positionnelle au cours du développement. Par un contrôle transcriptionnel spécifique de séquence, HoxD3 influence des programmes liés à la morphogenèse, à la migration cellulaire et à la spécification des lignages, en s’intégrant à des réseaux génétiques développementaux plus larges régulés par les gènes HOX. Une expression dérégulée de HOXD3 a été associée à des états de différenciation modifiés ainsi qu’à des phénotypes invasifs ou angiogéniques aberrants décrits dans plusieurs contextes de biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des circuits transcriptionnels impliqués dans la plasticité cellulaire associée aux maladies. En tant que facteur de transcription nucléaire, HoxD3 est couramment étudié pour l’identification de ses cibles en aval, sa régulation dépendante de la chromatine et ses effets contextuels sur les décisions de destinée cellulaire.

HoxD3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HOXD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HOXD3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HOXD3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HOXD3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.