Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxC10 (m): sc-431637

Présentation

Hoxc10 code le facteur de transcription à homéoboîte HOXC10, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui contribue à établir la mise en place de l’axe antéro-postérieur et l’identité positionnelle au cours de l’embryogenèse. Dans le développement de la souris, les programmes HOX s’intègrent à des réseaux de signalisation pilotés par des morphogènes tels que les voies WNT, FGF, acide rétinoïque et BMP afin de coordonner la spécification des lignages, la formation du squelette axial et la différenciation régionale. Au-delà du développement, une régulation altérée des gènes HOX est fréquemment associée à des réseaux transcriptionnels dérégulés qui influencent le maintien du destin cellulaire, la migration et la différenciation. La perturbation des programmes associés à HOXC10 est donc pertinente pour étudier les défauts congénitaux de mise en place des patrons et les mécanismes de reprogrammation transcriptionnelle impliqués dans la biologie des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxC10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hoxc10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hoxc10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hoxc10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxC10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hoxc10 pour l'étude de la signalisation de HoxC10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hoxc10 essentiels à la fonction de HoxC10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hoxc10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxC10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HoxC10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hoxc10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxC10 plasmide HDR (m) et le HoxC10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hoxc10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hoxc10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.