Plasmide CRISPR d'Activation (m) HoxC10: sc-431637-ACT

Hoxc10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxC10, une protéine HOX postérieure qui contrôle l’organisation embryonnaire et l’identité positionnelle en régulant des programmes d’expression génique du développement. Chez la souris, l’activité de HoxC10 contribue à la morphogenèse axiale et des membres et influence la différenciation mésenchymateuse via des réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec les voies de signalisation WNT, BMP et de l’acide rétinoïque. Une expression dérégulée des gènes HOX est fréquemment associée à une spécification de lignée altérée, une prolifération aberrante et des phénotypes invasifs dans des contextes pertinents pour la maladie, faisant de Hoxc10 un nœud utile pour étudier les erreurs de patterning du développement et la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. HoxC10 constitue également un modèle accessible pour explorer le contrôle épigénétique des clusters HOX et les transitions d’état de la chromatine au cours de la différenciation.

HoxC10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hoxc10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxC10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hoxc10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hoxc10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxC10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hoxc10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxC10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxC10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hoxc10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.