Plasmide Double Nickase (h) HoxB9: sc-401770-NIC

HOXB9 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB9, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à établir la polarité antéro-postérieure et l’identité des tissus au cours de l’embryogenèse. Dans les cellules humaines, HoxB9 influence la spécification des lignages et les programmes de différenciation en modulant des réseaux transcriptionnels liés à la morphogenèse, au contrôle du cycle cellulaire et à la plasticité épithélio-mésenchymateuse. Une expression dérégulée de HOXB9 a été associée à des états transcriptionnels oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux, notamment via des effets sur des signatures géniques pro-angiogéniques et invasives, et elle est également étudiée dans des troubles du développement impliquant une altération des patrons de mise en place. En tant que nœud au sein de circuits de régulation des gènes homéoboîtes, HoxB9 est pertinent pour analyser les réseaux géniques du développement et le contrôle transcriptionnel du destin cellulaire.

HoxB9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HOXB9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HOXB9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HOXB9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HOXB9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.