Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxB9: sc-401770-ACT

HOXB9 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB9, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique aux séquences, qui régule la mise en place des axes antéro-postérieurs, la morphogenèse des tissus et les décisions de destinée cellulaire au cours du développement. Dans les cellules humaines, HOXB9 contribue à des programmes transcriptionnels qui influencent la différenciation et la prolifération, en s’intégrant à des réseaux plus larges de régulation génique du développement, tels que les interactions entre les HOX et leurs cofacteurs, ainsi que le contrôle médié par la chromatine des enhancers spécifiques de lignée. Une expression dérégulée de HOXB9 a été associée à des modifications des dynamiques épithélio-mésenchymateuses, de la signalisation angiogénique et à des phénotypes invasifs dans de multiples contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le remodelage transcriptionnel oncogénique. En tant que régulateur nucléaire, HoxB9 est fréquemment étudié pour son impact sur les circuits d’expression génique qui gouvernent la migration, le remodelage de la matrice extracellulaire et les états de type cellule souche.

HoxB9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXB9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxB9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXB9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXB9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxB9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXB9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxB9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxB9 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXB9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.