Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxB7: sc-404331-ACT

HOXB7 humain code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB7, un régulateur se liant à l’ADN qui coordonne la mise en place des patrons embryonnaires et les décisions de destinée cellulaire via des programmes transcriptionnels dépendant du contexte. Dans les tissus adultes et les systèmes expérimentaux, HOXB7 peut influencer la différenciation épithéliale, la prolifération et la migration en modulant des réseaux géniques associés à la signalisation du développement et aux voies des facteurs de croissance, notamment via des interactions avec les sorties MAPK/ERK et des récepteurs à activité tyrosine kinase. Une expression dérégulée de HOXB7 a été associée à des phénotypes oncogéniques tels qu’une invasivité accrue, une signalisation pro‑angiogénique et un contrôle du cycle cellulaire altéré dans de multiples contextes tumoraux, ce qui appuie son intérêt comme nœud mécanistique dans les études de reprogrammation transcriptionnelle. En tant que facteur de transcription aux nombreuses cibles en aval, HOXB7 est couramment étudié pour ses rôles dans les circuits de régulation génique du développement, la plasticité épithélio‑mésenchymateuse et la signalisation liée au microenvironnement tumoral.

HoxB7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXB7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxB7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXB7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXB7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxB7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXB7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxB7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxB7 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXB7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.