HoxB2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404533-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HoxB2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HoxB2 Double-Nickase-Plasmid (h) und HoxB2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HOXB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HoxB2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404533-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxB2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404533-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXB2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB2, einen sequenzspezifisch DNA-bindenden Regulator, der während der Embryogenese die anteroposteriore Achse strukturiert und Segmentierungs- sowie Differenzierungsprogramme im sich entwickelnden Hinterhirn und in von der Neuralleiste abgeleiteten Geweben unterstützt. Als Bestandteil von HOX-Genregulationsnetzwerken koordiniert HoxB2 Transkriptionsprogramme, die die Festlegung von Zelllinien, die Aufrechterhaltung der Zellidentität und morphogen-abhängige Entwicklungswege steuern, einschließlich der retinsäureabhängigen Musterbildung. Eine fehlregulierte HOXB2-Expression wurde in mehreren Tumorarten beschrieben und wird im Hinblick auf abnorme Differenzierungszustände, invasives Verhalten und transkriptionelle Umprogrammierung in Krebsmodellen untersucht. In humanen Zellsystemen wird die gezielte Veränderung von HOXB2 häufig genutzt, um entwicklungsbiologische Genregulationsschaltkreise und krankheitsrelevante Veränderungen des Zellschicksals zu analysieren.
HoxB2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.