Plásmido Doble Nickase (h) HoxA4: sc-405914-NIC

HOXA4 codifica el factor de transcripción con homeobox HoxA4, un regulador de unión al ADN que ayuda a establecer el patrón anteroposterior y mantiene la identidad posicional durante la embriogénesis. En células humanas, HoxA4 modula programas transcripcionales vinculados con la diferenciación, la proliferación y el compromiso de linaje, integrándose con redes de señalización del desarrollo y de regulación de la cromatina. La actividad de HOXA4 está estrechamente ligada a la regulación del clúster HOX, incluido el control epigenético por los complejos Polycomb/Trithorax, y contribuye a la expresión génica específica de tejido en contextos hematopoyéticos y mesenquimales. La desregulación de la expresión de HOXA4 se ha asociado con firmas génicas del desarrollo alteradas y se estudia en relación con estados transcripcionales oncogénicos y una diferenciación aberrante.

HoxA4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HOXA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HOXA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HOXA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HOXA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.