Plasmide CRISPR d'Activation (m) HoxA10: sc-420900-ACT

Hoxa10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA10, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui organise l’axe antéro-postérieur au cours de l’embryogenèse et contribue à définir l’identité régionale dans les systèmes urogénital et hématopoïétique en développement. Dans les tissus adultes, HoxA10 participe aux programmes d’engagement de lignée et de différenciation en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec des cofacteurs tels que PBX et MEIS, en influençant l’état de la chromatine et l’expression génique en aval. Une expression altérée de HOXA10 a été associée à des anomalies du développement et à des états de différenciation dérégulés, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de la morphogenèse et les décisions de destin cellulaire dans des modèles murins. Son activité recoupe des voies qui régissent la prolifération et la différenciation, ce qui soutient la recherche sur la régulation génique dépendante du contexte dans le développement et les phénotypes pertinents pour les maladies.

HoxA10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hoxa10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA10 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hoxa10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hoxa10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hoxa10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA10 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hoxa10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.