Plasmide Double Nickase (h) HoxA1: sc-403158-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HoxA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HoxA1 Double Nickase (h) et le plasmide HoxA1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HOXA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HoxA1 Antibody (1E10): sc-293257
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HoxA1 | sc-403158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HoxA1 | sc-403158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXA1 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA1, un régulateur précoce du développement qui contrôle la mise en place de l’axe antéro-postérieur et l’identité des segments en se liant à l’ADN via son homéodomaine et en coordonnant des programmes transcriptionnels avec des cofacteurs tels que PBX et MEIS. HoxA1 influence les décisions de destinée cellulaire, le calendrier de la différenciation et les réseaux de gènes répondant aux morphogènes, en s’intégrant à des voies de signalisation incluant l’acide rétinoïque, WNT et FGF au cours de l’embryogenèse. Une expression dérégulée de HOXA1 ou des variations génétiques ont été associées à des phénotypes congénitaux du développement et ont été rapportées dans plusieurs signatures transcriptionnelles liées à des maladies, ce qui souligne son intérêt pour l’étude de la spécification des lignages et de la dérégulation de l’expression génique.
HoxA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HOXA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HOXA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HOXA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HOXA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.