Plásmido CRISPR de Activación (h) HOS: sc-404203-ACT

FBXW11 codifica la proteína humana con dominio F‑box y repeticiones WD HOS (también conocida como β‑TrCP2), un componente de reconocimiento de sustratos del complejo ligasa de ubiquitina E3 tipo SCF (SKP1–CUL1–F‑box) que dirige la degradación proteasomal de proteínas reguladoras fosforiladas. Mediante la ubiquitinación de mediadores clave de señalización, HOS influye en vías como la señalización de NF‑κB a través de proteínas de la familia IκB y la regulación de Wnt/β‑catenina, moldeando así las respuestas inflamatorias, la progresión del ciclo celular y las decisiones de destino celular. Las alteraciones en la actividad de FBXW11 o en el reconocimiento de sus sustratos pueden perturbar la proteostasis y la intensidad de la señal, vinculando este eje con la reprogramación de la señalización asociada al cáncer y con fenotipos inmunitarios/inflamatorios. Como factor nodal de la vía de ubiquitina, FBXW11 se estudia con frecuencia en contextos de control transcripcional, degrones dependientes de fosforilación y comunicación cruzada entre vías.

HOS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXW11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HOS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXW11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXW11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HOS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXW11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HOS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HOS en células tumorales con expresión de FBXW11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.