Plásmido CRISPR de Activación (h) Homer: sc-401175-ACT

El gen humano **HOMER1** codifica Homer, una proteína de andamiaje de la densidad postsináptica que acopla los receptores metabotrópicos de glutamato del grupo I y otras proteínas sinápticas a módulos de señalización intracelular de Ca2+, incluida la liberación de calcio dependiente del receptor de IP3. Mediante interacciones mediadas por su dominio EVH1, Homer organiza complejos multiproteicos que influyen en la neurotransmisión glutamatérgica, la plasticidad sináptica y la remodelación dependiente de la actividad de las espinas dendríticas. **HOMER1** participa en vías que conectan la activación de receptores con la homeostasis del calcio y la señalización de quinasas aguas abajo que moldean la excitabilidad neuronal y las respuestas transcripcionales. Se ha asociado la alteración de la expresión de **HOMER1** o de la conectividad de sus redes con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la disfunción sináptica.

Homer-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HOMER1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Homer-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HOMER1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HOMER1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Homer-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HOMER1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Homer-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Homer-1 en células tumorales con expresión de HOMER1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.