Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP M: sc-401670-ACT

HNRNPM codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea M (hnRNP M), una proteína de unión a ARN que se asocia con transcritos nacientes para regular el procesamiento del pre-ARNm, el empalme alternativo y la maduración del ARNm. hnRNP M participa en el metabolismo del ARN relacionado con el espliceosoma e influye en la selección de isoformas de transcritos, lo que puede afectar programas de estado celular como la proliferación, la diferenciación y la expresión génica adaptativa al estrés. La desregulación de las redes de empalme dependientes de HNRNPM se ha vinculado con una transición epitelio–mesénquima alterada y con firmas aberrantes de procesamiento de ARN observadas en múltiples contextos de enfermedad, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar las consecuencias a nivel de vía de la perturbación de factores de empalme. La modulación experimental de los niveles de hnRNP M puede ayudar a cartografiar eventos de cambio de isoformas, dependencias de interacción ARN–proteína y cambios de señalización aguas abajo impulsados por la remodelación del transcriptoma.

hnRNP M El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP M El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP M. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP M en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP M en células tumorales con expresión de HNRNPM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.