Partículas Lentivirales de Activación (h) hnRNP K: sc-417266-LAC

HNRNPK codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea K (hnRNP K), una proteína multifuncional de unión a ADN y ARN que coordina el control transcripcional, el empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad del ARNm y la traducción. hnRNP K actúa como un eje de andamiaje que conecta vías dependientes de señales con la cromatina y complejos ribonucleoproteicos, e influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y programas de expresión génica adaptativos al estrés. Mediante interacciones con factores como redes reguladas por p53 y módulos de señalización de quinasas, hnRNP K contribuye a moldear transcriptomas y proteomas específicos del contexto. La desregulación de la expresión de HNRNPK o de la actividad de hnRNP K se ha asociado con fenotipos alterados de diferenciación y proliferación, y se investiga con frecuencia en estudios moleculares relacionados con el cáncer y el neurodesarrollo.

Las partículas de activación lentiviral hnRNP K (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HNRNPK en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral hnRNP K (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HNRNPK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de hnRNP K. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HNRNPK y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.