hnRNP K CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417266-ACT

HNRNPK kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein K (hnRNP K), ein multifunktionales Nukleinsäure-bindendes Protein, das durch Interaktionen mit Poly(C)-RNA/DNA-Elementen und vielfältigen Signalpartnern Transkription, prä‑mRNA‑Spleißen, mRNA‑Stabilität und Translation koordiniert. hnRNP K integriert Signale aus Signalwegen wie MAPK/ERK sowie Netzwerken der DNA‑Schadensantwort, um chromatinassoziierte Genexpressionsprogramme und eine stressadaptive RNA‑Prozessierung zu modulieren. Indem es als Gerüstprotein für Ribonukleoprotein-Komplexe fungiert, beeinflusst es Zellzyklusprogression, Apoptose und Differenzierung. Eine fehlregulierte HNRNPK-Expression oder -Funktion wurde mit veränderter Regulation onkogener und neuroentwicklungsbezogener Gene in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der RNA‑Biologie und der signalabhängigen Transkriptionskontrolle macht.

hnRNP K Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HNRNPK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

hnRNP K Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HNRNPK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HNRNPK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen hnRNP K-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HNRNPK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von hnRNP K-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des hnRNP K-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HNRNPK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.