Plásmido CRISPR de Activación (m) hnRNP I: sc-422470-ACT

El gen murino **Ptbp1** codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea I (hnRNP I/PTBP1), una proteína de unión a ARN que regula el *splicing* alternativo del pre-ARNm, el procesamiento del extremo 3′, la estabilidad del ARNm y la traducción dependiente de sitios internos de entrada del ribosoma (IRES). hnRNP I configura programas de transcritos específicos de tejido e influye en las transiciones de estado celular al controlar la selección de exones en redes vinculadas a la diferenciación neuronal, la proliferación y la adaptación metabólica. Mediante el control coordinado de la maduración del ARN y la traducción, PTBP1 se integra con vías que gobiernan la remodelación del citoesqueleto y la expresión génica sensible al estrés. La actividad desregulada de PTBP1 se ha asociado con cambios en los paisajes de *splicing* del ARN relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y para la remodelación oncogénica de programas de expresión génica, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del procesamiento del ARN.

hnRNP I El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ptbp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP I El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ptbp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ptbp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ptbp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP I en células tumorales con expresión de Ptbp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.