hnRNP E2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402274

Descripción general

PCBP2 codifica la proteína humana de unión a ARN hnRNP E2, un factor de unión a poli(C) que se asocia con ARN monocatenario para regular el empalme (splicing) del ARNm, su estabilidad, la exportación nuclear y la traducción. hnRNP E2 participa en el control génico postranscripcional al coordinar complejos ribonucleoproteicos que determinan el destino de los transcritos y la producción proteica, incluida la modulación del silenciamiento traduccional dependiente de las UTR y de programas de procesamiento de ARN. A través de estas actividades, PCBP2 influye en las respuestas celulares al estrés, así como en vías de proliferación y diferenciación, y con frecuencia se estudia en el contexto de la desregulación del metabolismo del ARN. La función o la expresión alteradas de PCBP2/hnRNP E2 se han vinculado a fenotipos relevantes para enfermedad, incluida la señalización oncogénica y cambios en las interacciones huésped–virus mediados por redes regulatorias de ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO hnRNP E2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCBP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCBP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCBP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína hnRNP E2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCBP2 para la investigación de la señalización de hnRNP E2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCBP2 críticos para la función de hnRNP E2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCBP2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido hnRNP E2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCBP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR hnRNP E2 (h) y el plásmido HDR hnRNP E2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCBP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCBP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.