hnRNP A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400704-ACT

HNRNPA1 codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea humana A1 (hnRNP A1), uma abundante proteína ligante de RNA que coordena o splicing de pré‑mRNA, a seleção alternativa de éxons, a exportação nuclear de mRNA e a regulação da tradução por meio de interações com componentes do spliceossomo e com a maquinaria de transporte de RNA. A hnRNP A1 também participa da manutenção dos telômeros e da dinâmica de grânulos de estresse, conectando o metabolismo de RNA às respostas celulares ao estresse. A desregulação do processamento de RNA dependente de HNRNPA1 e a agregação proteica têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e neuromusculares, e alterações na atividade da hnRNP A1 foram relatadas em múltiplos contextos de câncer, nos quais a remodelação de isoformas de transcritos influencia vias de proliferação e sobrevivência. Como regulador central da plasticidade do transcriptoma, a hnRNP A1 é frequentemente estudada em vias que governam a estabilidade de RNA, programas de expressão gênica adjacentes à resposta a dano no DNA e a proteostase.

hnRNP A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP A1 em células tumorais com expressão de HNRNPA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.