Partículas Lentivirales de Activación (h) hnRNP A0: sc-406924-LAC

HNRNPA0 codifica hnRNP A0, una proteína de unión a ARN que se asocia con complejos mRNP para regular la expresión génica postranscripcional, incluida la estabilidad del ARNm, su degradación (recambio) y la traducción de transcritos seleccionados. A través de estas funciones contribuye a las respuestas celulares al estrés y a la remodelación dinámica de programas de expresión génica que afectan el control del ciclo celular y la señalización inflamatoria. hnRNP A0 se ha estudiado en el contexto de redes de señalización impulsadas por quinasas y de vías de metabolismo del ARN que determinan el destino de los transcritos en condiciones de estrés. La desregulación de las proteínas de la familia hnRNP y de los mecanismos asociados de procesamiento del ARN se vincula con frecuencia a fenotipos alterados de proliferación y adaptación al estrés, relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos que implican una expresión génica aberrante.

Las partículas de activación lentiviral hnRNP A0 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HNRNPA0 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral hnRNP A0 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HNRNPA0, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de hnRNP A0. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HNRNPA0 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.