Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP A0: sc-406924-ACT

HNRNPA0 codifica hnRNP A0, una proteína de unión a ARN que se asocia con complejos de ribonucleoproteínas nucleares heterogéneas para influir en la regulación génica postranscripcional. Se ha implicado a hnRNP A0 en el control de la estabilidad y la traducción del ARNm, incluidos transcritos involucrados en el control del ciclo celular y la señalización sensible al estrés, lo que la vincula con un metabolismo del ARN más amplio y con vías de puntos de control. Al modular el destino de ARNm específicos, hnRNP A0 puede afectar las respuestas celulares al daño en el ADN, la inflamación y las señales de proliferación. La actividad desregulada de la familia hnRNP y los programas alterados de procesamiento de ARN se observan con frecuencia en el cáncer y en otros trastornos con control perturbado de la expresión génica, lo que convierte a HNRNPA0 en un nodo útil para estudios mecanísticos.

hnRNP A0 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPA0 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP A0 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPA0 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPA0, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP A0. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPA0 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP A0 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP A0 en células tumorales con expresión de HNRNPA0 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.