hnRNP A/B Double Nickase Plasmid (h): sc-403454-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das hnRNP A/B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- hnRNP A/B Double-Nickase-Plasmid (h) und hnRNP A/B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HNRNPAB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: hnRNP A/B: sc-376411
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
hnRNP A/B Double Nickase Plasmid (h) | sc-403454-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
hnRNP A/B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403454-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HNRNPAB kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein A/B (hnRNP A/B), ein RNA-bindendes Protein, das mit neu entstehenden Transkripten assoziiert, um das Pre-mRNA-Spleißen, die mRNA-Stabilität und den nukleozytoplasmatischen Transport zu koordinieren. Durch die Interaktion mit Spleißosomen-Komplexen und größeren Ribonukleoprotein-Assemblies trägt hnRNP A/B dazu bei, das Spektrum der Transkript-Isoformen zu formen sowie posttranskriptionelle Genregulationsprogramme zu steuern, die mit Zellzykluskontrolle und Stressantworten verknüpft sind. Veränderte Aktivität von hnRNP-Familienmitgliedern und Defekte in der RNA-Prozessierung werden häufig mit fehlregulierten Genexpressionsnetzwerken in Krebs- und neurodegenerativen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was HNRNPAB zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien des RNA-Stoffwechsels macht. Eine funktionelle Perturbation von HNRNPAB kann genutzt werden, um die Folgen von Spleißveränderungen und Entscheidungen über das Schicksal von RNA auf Signalweg-Ebene in menschlichen Zellen zu untersuchen.
hnRNP A/B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HNRNPAB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HNRNPAB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HNRNPAB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HNRNPAB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.