HNF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420893

Übersicht

Onecut1 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HNF-6, einen zentralen Regulator der Differenzierung endodermabgeleiteter Gewebe in der Maus, darunter pankreatische, hepatische und biliäre Zelllinien. HNF-6 bindet an cis-regulatorische Elemente, um Transkriptionsprogramme zu koordinieren, die die epitheliale Morphogenese, die Gangentwicklung und Zellschicksalsentscheidungen steuern, und es steht während der Organogenese und der Gewebehomöostase in funktioneller Wechselwirkung mit der Notch-, Wnt/β-Catenin- und TGF-β-Signalgebung. Eine veränderte Onecut1-Aktivität wurde mit Defekten in der Entwicklung pankreatischer endokriner Zellen und der Musterbildung von Gangstrukturen in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zu Stoffwechselstörungen und Entwicklungsphänotypen relevant macht. In experimentellen Systemen wird die Störung von Onecut1/HNF-6 genutzt, um Transkriptionsnetzwerke zu untersuchen, die den Chromatinzustand mit der Linienspezifizierung und der Organreifung koppeln.

Das HNF-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Onecut1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Onecut1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Onecut1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HNF-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Onecut1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HNF-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Onecut1-Exone abzielen, die für die HNF-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Onecut1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HNF-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HNF-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Onecut1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HNF-6 HDR-Plasmid (m) und HNF-6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Onecut1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Onecut1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.