HNF-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401082

Descripción general

ONECUT1 codifica el factor nuclear hepatocitario 6 (HNF-6), un factor de transcripción homeobox CUT que coordina programas de regulación génica en tejidos derivados del endodermo, especialmente el hígado y el páncreas. HNF-6 modula la diferenciación epitelial, la morfogénesis ductal y la expresión de genes metabólicos mediante el control transcripcional de vías del desarrollo y hepatobiliares, incluida la interacción cruzada con las señales de Notch y TGF-β. En células humanas, la actividad alterada de ONECUT1 se ha asociado con una homeostasis de la glucosa alterada, con el desarrollo endocrino pancreático y con disfunción hepatobiliar, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar perturbaciones en redes transcripcionales. Sus dianas aguas abajo y sus interacciones cooperativas con otros factores de transcripción hepáticos y pancreáticos sitúan a HNF-6 como un nodo clave para analizar la especificación de linaje y la regulación metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ONECUT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ONECUT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ONECUT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HNF-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ONECUT1 para la investigación de la señalización de HNF-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ONECUT1 críticos para la función de HNF-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ONECUT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HNF-6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HNF-6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ONECUT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HNF-6 (h) y el plásmido HDR HNF-6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ONECUT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ONECUT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.