HNF-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401082-ACT

ONECUT1 codifica o fator de transcrição HNF-6, uma proteína com homeodomínio que coordena programas gênicos específicos de tecido durante o desenvolvimento endodérmico e a homeostase do epitélio adulto. Em células humanas, o HNF-6 integra sinais de promotores e enhancers para regular a especificação de linhagens e vias de diferenciação, com papéis proeminentes em redes transcricionais hepáticas e pancreáticas e na morfogênese epitelial. Ao modular a expressão de genes metabólicos, secretórios e de identidade celular, ONECUT1 influencia processos como a organogênese, a manutenção do destino celular e o controle transcricional responsivo ao estresse. A atividade desregulada de ONECUT1/HNF-6 tem sido associada a estados de diferenciação alterados e à reprogramação transcricional observada em contextos de doenças metabólicas e epiteliais, sustentando sua utilidade como um nó para estudos mecanísticos de circuitos de regulação gênica.

HNF-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ONECUT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ONECUT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ONECUT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ONECUT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-6 em células tumorais com expressão de ONECUT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.