Plásmido CRISPR de Activación (h) HNF-3α: sc-400743-ACT

FOXA1 (HNF-3α) es un factor de transcripción pionero de la familia forkhead que se une a la cromatina compactada para establecer paisajes reguladores accesibles y coordinar programas de expresión génica específicos de linaje. En tejidos epiteliales humanos, integra la señalización de receptores hormonales con redes transcripcionales que controlan la diferenciación, el metabolismo y la progresión del ciclo celular, incluida una amplia comunicación cruzada con vías de receptores nucleares como la transcripción dependiente de los receptores de estrógeno y andrógeno. La actividad de FOXA1 influye en la selección de potenciadores (enhancers) y en la remodelación de la cromatina, dando forma a procesos del desarrollo y de la homeostasis en el hígado, el pulmón, el páncreas y el epitelio mamario. La expresión desregulada de FOXA1 o perfiles alterados de unión a la cromatina se estudian con frecuencia en cánceres impulsados por hormonas y en otras enfermedades caracterizadas por una identidad epitelial perturbada y una reprogramación transcripcional.

HNF-3α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HNF-3α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HNF-3α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HNF-3α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HNF-3α en células tumorales con expresión de FOXA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.