HNF-3αCRISPR激活质粒(h): sc-400743-ACT

FOXA1（HNF-3α）是一种“先导型”（pioneer）叉头盒（forkhead）转录因子，能够结合致密的染色质，建立可被访问的调控景观，并协调谱系特异性的基因表达程序。在人类上皮组织中，它将激素受体信号与控制分化、代谢和细胞周期进程的转录网络整合起来，并与雌激素受体、雄激素受体等核受体通路介导的转录存在广泛串扰。FOXA1 的活性会影响增强子选择与染色质重塑，从而塑造肝、肺、胰腺以及乳腺上皮的发育与稳态过程。FOXA1 表达失调或染色质结合谱改变，常见于激素驱动型癌症及其他以受扰的上皮细胞身份与转录重编程为特征的疾病研究中。

HNF-3α CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FOXA1的表达。

HNF-3α CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FOXA1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FOXA1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HNF-3α表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FOXA1位点，并能够研究内源性位点上依赖于HNF-3α的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FOXA1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HNF-3α通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。