Plásmido CRISPR de Activación (h) HMP19: sc-407313-ACT

El gen humano **HMP19** codifica **HMP19**, una proteína pequeña y en gran medida no caracterizada, con una anotación funcional limitada en las bases de datos de vías actuales. La evidencia transcriptómica disponible sugiere patrones de expresión restringidos a tipos celulares, lo que la convierte en un objetivo útil para estudiar la regulación génica dependiente del contexto y los programas transcripcionales aguas abajo. Dado que los datos mecanísticos siguen siendo escasos, la perturbación controlada de la expresión de **HMP19** puede ayudar a definir su papel en la homeostasis celular, incluidas posibles conexiones con estados de diferenciación y señalización sensible al estrés. Las firmas de expresión desregulada que implican loci poco anotados como **HMP19** se analizan cada vez más en estudios ómicos centrados en enfermedades para priorizar reguladores candidatos para su validación funcional posterior.

HMP19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HMP19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HMP19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HMP19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HMP19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HMP19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HMP19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HMP19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HMP19 en células tumorales con expresión de HMP19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.