Partículas Lentivirales de Activación (m) HMGI-C: sc-420880-LAC

El gen Hmga2 de ratón codifica la proteína arquitectónica de la cromatina HMGI-C, un factor no histónico que se une al ADN rico en AT y modula el ensamblaje del enhanceosoma para influir en programas transcripcionales que controlan la proliferación, el compromiso de linaje y la sincronización del desarrollo. HMGI-C se integra con redes de remodelación de la cromatina y de factores de transcripción para ajustar la progresión del ciclo celular, la plasticidad epitelio-mesenquimal y la autorrenovación de células madre/progenitoras. La expresión desregulada de Hmga2 se asocia con alteraciones del control del crecimiento y de los estados de diferenciación, lo que la convierte en un nodo molecular ampliamente utilizado para estudiar la regulación génica del desarrollo y los circuitos transcripcionales oncogénicos. En modelos murinos, Hmga2 sirve como un regulador manejable de los cambios en la arquitectura del genoma que acompañan a la transformación, la regeneración tisular y la reprogramación celular.

Las partículas de activación lentiviral HMGI-C (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hmga2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HMGI-C (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hmga2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HMGI-C. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hmga2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.