HMGCL Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403841-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HMGCLO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HMGCL (h) e o Plasmídeo Double Nickase HMGCL (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HMGCL. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HMGCL Anticorpo (63Z): sc-100548
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HMGCL Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMGCL Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCL codifica a liase de 3-hidroximetil-3-metilglutaril-CoA, uma enzima mitocondrial que catalisa a etapa terminal da cetogênese e do catabolismo da leucina ao converter HMG-CoA em acetoacetato e acetil-CoA. Essa atividade conecta o manejo mitocondrial de acetil-CoA ao equilíbrio energético celular durante o jejum e outros estresses metabólicos, e se integra a vias mais amplas que controlam a oxidação de ácidos graxos, a anaplerose e a homeostase redox. Alterações na função de HMGCL estão associadas a erros inatos do metabolismo que afetam a produção de corpos cetônicos e a degradação de aminoácidos de cadeia ramificada, tornando-o relevante para estudos de adaptação metabólica e fisiologia mitocondrial. Em biologia do câncer e imunometabolismo, o metabolismo de corpos cetônicos dependente de HMGCL tem sido investigado como um fator que contribui para a utilização de nutrientes e estados de sinalização sob hipóxia ou limitação de nutrientes.
HMGCL O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HMGCL em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HMGCL. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HMGCL. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HMGCL interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.