Plásmido Doble Nickase (h) HLF: sc-404752-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HLF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HLF (h) y el plásmido de doble nickasa HLF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HLF. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HLF Anticuerpo (4D8): sc-134359
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HLF | sc-404752-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HLF | sc-404752-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El HLF (hepatic leukemia factor) humano codifica un factor de transcripción PAR bZIP que se une a elementos promotores específicos para coordinar la expresión génica regulada por el ritmo circadiano y programas de transcripción específicos de tejido. HLF participa en redes transcripcionales que controlan la diferenciación, la homeostasis metabólica y las respuestas al estrés celular mediante la regulación de genes diana aguas abajo en el hígado y en linajes hematopoyéticos. La actividad desregulada de HLF se ha vinculado con la biología de las neoplasias hematológicas, incluida la reprogramación transcripcional impulsada por fusiones, y también se ha estudiado en contextos de disrupción circadiana y fenotipos metabólicos alterados. Como proteína nuclear que se une al ADN, HLF se investiga con frecuencia por su papel en los circuitos de regulación génica y el mantenimiento de linajes.
HLF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HLF en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HLF. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HLF. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HLF alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.