HLA-G Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401226-ACT

O HLA-G codifica uma molécula não clássica do MHC de classe I que modula o reconhecimento imune ao se ligar a receptores inibitórios como ILT2/LILRB1, ILT4/LILRB2 e KIR2DL4 em células NK, células T e populações mieloides. Sua expressão sustenta a tolerância imunológica na interface materno-fetal e contribui para a regulação da apresentação de antígenos e da função efetora citotóxica no contexto mais amplo da rede de checkpoints MHC classe I/NK. O HLA-G é frequentemente estudado em cenários de evasão imune e de microambientes imunossupressores, incluindo a biologia do câncer e condições de inflamação crônica. Alterações nos níveis de HLA-G e no uso de isoformas têm sido associadas à tolerância em transplantes, à autoimunidade e à modulação imune associada a patógenos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos em imunologia.

HLA-G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-G em células tumorais com expressão de HLA-G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.