Plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-F (h): sc-410821

Présentation

HLA-F code une molécule du CMH de classe I non classique qui participe à la surveillance immunitaire en modulant les interactions entre les cellules présentatrices d’antigènes et les lymphocytes, via sa liaison à des récepteurs inhibiteurs et activateurs présents sur les cellules NK et sur certains sous-ensembles de lymphocytes T. Contrairement aux protéines HLA-I classiques, fortement polymorphes, HLA-F présente une dynamique d’expression particulière, incluant une rétention intracellulaire et une augmentation de l’expression à la surface cellulaire en situation de stress, d’infection ou d’activation, ce qui favorise la modulation des points de contrôle immunitaires et de la tolérance. HLA-F contribue à des processus liés à la présentation de l’antigène, à la régulation des réponses cytotoxiques et à des mécanismes d’échappement immunitaire au sein des tissus inflammés et des microenvironnements tumoraux. Une expression dérégulée de HLA-F a été rapportée dans de multiples contextes immuno-médiés et oncologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour décrypter les voies contrôlant l’activation immunitaire, les réponses à l’interféron et la reconnaissance cellule–cellule.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-F (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HLA-F dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HLA-F, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HLA-F à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HLA-F.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HLA-F pour l'étude de la signalisation de HLA-F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HLA-F essentiels à la fonction de HLA-F
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HLA-F pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HLA-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HLA-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HLA-F. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HLA-F plasmide HDR (h) et le HLA-F (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HLA-F pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HLA-F définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.