Plasmide Double Nickase (m) Histone H3.3A: sc-420787-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Histone H3.3A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Histone H3.3A Double Nickase (m) et le plasmide Histone H3.3A Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant H3f3a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Histone H3.3A | sc-420787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Histone H3.3A | sc-420787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **H3f3a** code l’histone **H3.3A**, une variante de H3 indépendante de la réplication, déposée au niveau des gènes activement transcrits, des enhancers et d’autres éléments régulateurs, afin de façonner l’accessibilité de la chromatine et la fidélité transcriptionnelle. Le renouvellement de H3.3A contribue à la dynamique des nucléosomes pendant la transcription, les réponses au stress de réplication de l’ADN et le réassemblage de la chromatine après des dommages à l’ADN, ce qui le relie à des processus tels que la stabilité du génome, les transitions de destin cellulaire et la différenciation. Son dépôt s’articule avec des voies de régulation épigénétique qui coordonnent l’activité de l’ARN polymérase II, la fonction des enhancers et les complexes de remodelage de la chromatine. La dérégulation de la biologie de H3.3 et des profils de modifications post-traductionnelles est largement pertinente dans des modèles de troubles du développement et d’états chromatinien oncogéniques, où des programmes transcriptionnels altérés et des défauts de maintenance du génome constituent des phénotypes centraux.
Histone H3.3A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H3f3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H3f3a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H3f3a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H3f3a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.