Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone H2A.X: sc-400538-ACT

H2AFX codifica la variante de histona H2A.X, un componente central de la cromatina que se fosforila rápidamente en Ser139 (γH2AX) en respuesta a roturas de doble cadena del ADN. Esta modificación inicia la señalización de la respuesta al daño del ADN al reclutar factores mediadores y de reparación, coordinando las vías de las quinasas ATM/ATR, la remodelación de la cromatina, la activación de puntos de control y la reparación mediante unión de extremos no homólogos y recombinación homóloga. La dinámica de H2A.X influye en la tolerancia al estrés replicativo, la estabilidad de los telómeros y programas transcripcionales a escala genómica vinculados a la integridad de la cromatina. La desregulación de la señalización asociada a H2AFX se estudia con frecuencia en contextos de inestabilidad genómica, estrés oncogénico y sensibilidad a exposiciones genotóxicas.

Histone H2A.X El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de H2AFX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone H2A.X El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus H2AFX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional H2AFX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone H2A.X. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo H2AFX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone H2A.X en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone H2A.X en células tumorales con expresión de H2AFX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.