Plásmido Doble Nickase (h) Histone Deacetylase 3 (HDAC3): sc-400446-NIC

HDAC3 codifica la desacetilasa de histonas 3, una HDAC de clase I que cataliza la eliminación de grupos acetilo de proteínas histónicas y no histónicas para regular la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales. HDAC3 actúa de forma destacada dentro del complejo correpresor NCoR/SMRT, conectando el control epigenético con la señalización de receptores nucleares, las respuestas transcripcionales inflamatorias y la regulación de genes metabólicos. Mediante la coordinación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación específica de linaje, HDAC3 contribuye a mantener la identidad celular y la estabilidad del genoma. La actividad o expresión desregulada de HDAC3 se ha implicado en estados transcripcionales oncogénicos, en procesos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, y en patologías impulsadas por el sistema inmunitario, lo que la convierte en una diana frecuente en estudios mecanísticos de epigenética.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HDAC3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HDAC3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HDAC3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HDAC3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.